6, Rue Ibn Ennafis - Z.I. Lac 3 Tunisie
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IVD
SIGNIFICATION CLINIQUE
La syphilis est une maladie vénérienne causée par une infection à T. pallidum. La transmission de T.
pallidum se fait par contact direct avec une lésion productive. La période d’incubation est approxi-
mativement de 20 jours et la maladie progresse selon 3 phases distinctes avec des symptômes
différents. Les anticorps anti-T. pallidum apparaissent lors de la première phase et peuvent encore
persister chez 85-90% des patients après traitement.
PRINCIPE
Des hématies aviaires fixées sont sensibilisées par un extrait de tréponème pallidum (S. Nicholas).
Si l’échantillon à tester contient des anticorps spécifiques ceux-ci forment un agglutinat avec les
érythrocytes sensibilisés.
Les échantillons négatifs donnent un bouton d’hématies bien défini au fond de la cupule.
Les réactions non spécifiques sont dépistées par les cellules de contrôle (hématies non sensibili-
sées).
COMPOSITION DES REACTIFS (100 Tests)
Cellules-test hématies de poules sensibilisées avec l’antigène tréponémique
1 flacon de 7,5 ml
Cellules de contrôle hématies de poule non sensibilisées
1 flacon de 7,5 ml
Tampon pour diluer le sérum
1 flacon de 20 ml
Sérum positif pré-dilué au 1/20 1 flacon de 1 ml
Sérum négatif pré-dilué au 1/20 1 flacon de 1 ml
Microplaques U en polystyrène 3 plaques fournies (100 Tests)
*Sérum :
Sérum frais, le sérum peut être conservé à 2 - 8°C pendant 5 jours, pour des périodes plus longues,
les sérums doivent être congelés (-20° C).
*Plasma :
Des échantillons de plasma EDTA peuvent être utilisés pour screening dans les banques de sang.
PRECAUTIONS
Les réactifs Biomaghreb sont destinés à du personnel qualifié, pour un usage in vitro (ne pas pipeter
avec la bouche).
• Consulter la FDS en vigueur disponible sur demande ou sur www.biomaghreb.com;
• Vérifier l’intégrité des réactifs avant leur utilisation ; et
• Elimination des déchets : respecter la législation en vigueur.
Par mesure de sécurité, traiter tout spécimen ou réactif d’origine biologique comme potentiellement
infectieux. Respecter la législation en vigueur.
CONSERVATION ET STABILITE
Conserver à 2-8°C jusqu’à la date limite d’utilisation indiquée sur ce coffret.
MODE OPERATOIRE
TEST QUALITATIF
• Cupule n° 1 : ajouter 10 µl de sérum à tester à 190 µl de tampon on obtient une dilution au
1/20.
• Mélanger soigneusement : distribuer 25 µl de cette dilution dans les cupules 2 et 3.
• Cupule n° 2 : ajouter 75 µl de cellules de contrôle
• Cupule n° 3 : ajouter 75 µl de cellules test.
• Mélanger, couvrir la plaque, attendre 45 mn à température ambiante, à l’abri de toute source
de chaleur et de toute vibration.
Attention : Les sérums de contrôle positif et négatif, qui doivent être introduits dans chaque
série, sont pré dilués au 1/20 : ne faire que les cupules 2 et 3.
TEST QUANTITATIF
Cupule A B C D E F G H
Tampon 25 25 25 25 25 25 25 25
Sérum au 1/20 provenant
de la cupule 1 (μl)
25 25 25 25 25 25 25 25
Cellules test (μl)
75 75 75 75 75 75 75 75
Dilution 1/N
80 160 320 640 1280 2560 5120 10240
* Homogénéiser, couvrir la plaque, et attendre 45 minutes minimum à température ambiante à l’abri
de toute source de chaleur et de toute vibration.
INTERPRETATION
- Procéder à la lecture des résultats après 45 mn.
- Les résultats sont stables 24h.
- Les images ci-dessous correspondent à des réactions réalisées dans des microplaques U.
4+ : Voile homogène de cellules couvrant la totalité du puits, quelquefois avec des bords repliés.
3+ : Voile homogène de cellules couvrant partiellement le fond du puits
2+: Voile de cellules entourées par un cercle de cellules
1+ : Voile de cellules entourées par un cercle plus épais de cellules
± Bouton de cellules avec une petite ouverture centrale
-: Bouton de cellules avec, ou sans, une très petite ouverture centrale
Positif : de (4+) à (1+)
Douteux : ±
Négatif : -
Pour l’interprétation des résultats, il est impératif de les comparer avec les agglutinats des sérums
de contrôle.
Une agglutination dans la cupule 2 du test de dépistage indique la présence d’agglutination non
spécifique.
Dans ce cas traiter le sérum de la façon suivante :
Pour 100 µl de sérum, ajouter 400 µl de cellules de contrôle, agiter, et attendre 1h à la température
du laboratoire, centrifuger 5 mn à 1000 trs/mn ; recommencer le test avec le surnageant, sans oublier
que le sérum se trouve dilué au 1/5 par ce traitement (le rediluer au 1/4 pour obtenir l’équivalent de
la cupule 1).
Le contrôle négatif doit donner un résultat négatif.
Le contrôle positif doit donner un résultat positif dans le test qualitatif et la réaction doit rester posi-
tive jusqu’au titre indiqué sur l’étiquette du flacon et au delà une double dilution peut être faite dans
le cadre du test quantitatif
TEST QUALITATIF :
Un résultat positif indique la présence d’anticorps anti T pallidum résultant d’une infection passée
ou présente.
Un résultat négatif indique l’absence d’anticorps anti-T pallidum (voir limites de la méthode). Un
résultat douteux dans le test qualitatif peut correspondre a un taux bas d’anticorps dans les stades
précoces de syphilis ou à un taux résiduel d’anticorps dans les syphilis traitées. Dans ce cas, un
nouvel échantillon supplémentaire pourra être testé pour démontrer une possible augmentation du
titre des anticorps.
TEST QUANTITATIF :
Le titre approximatif correspondra à la dernière dilution donnant une réaction.
LIMITES
*Bien que le sérum soit l’échantillon type pour tous les tests de syphilis, des échantillons de plasma
EDTA peuvent être utilisés pour screening dans les banques de sang. Cependant, certaines réactions
peuvent s’avérer faussement positives. Dans ce cas, on devra renouveler l’expérience avec du sérum
sur tous les tests initialement positifs ou douteux.
*Les anticorps spécifiques peuvent persister pendant une longue période, même après un traitement
réussi de la maladie. Afin d’estimer la réponse au traitement, l’emploi d’un test réagine (RPR reditest)
est recommandé.
*La technique TPHA peut donner des réactions croisées avec d’autres formes d’infections a tré-
ponèmes et des réactions faussement positives avec des échantillons de patients atteints de la mo-
nonucléose infectieuse, de la lèpre, toxicomanes ou de maladies auto-immunes
Occasionnellement, dans certains cas de syphilis primaires précoces, les anticorps spécifiques ne
pourront pas être détectés par la technique TPHA.
TPHA
Test d’hémagglutination de la syphilis
USAGE IN VITRO
FT Fr 45 Date de MAJ : 10/ 2020 Version B
Fabricant Date de
péremption
Usage “In vitro” Température
de conservation
Référence Produit Consulter la notice Conserver à l’abri
de la lumière
Sufsant
pour < n > essais
Numéro de lot
