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Tél. : 71 182 500 - Fax : 71 182 250
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IVD
USAGE IN VITRO
FT Fr 49 Date de MAJ : 10/ 2020 Version B
Fabricant Date de
péremption
Usage “In vitro” Température
de conservation
Référence Produit Consulter la notice Conserver à l’abri
de la lumière
Sufsant
pour < n > essais
Numéro de lot
SIGNIFICATION CLINIQUE
Le dosage des protéines totales dans les urines et le liquide céphalorachidien (LCR) est utilisé res-
pectivement pour le diagnostic des maladies rénales ou celles du système nerveux central. L’éléva-
tion du niveau de protéines dans les urines indique, dans la majorité des cas, une atteinte rénale,
mais peut aussi parfois résulter d’une infection urinaire ou d’un diabète. La détermination du taux de
protéines dans le LCR est indispensable dans la surveillance des maladies neuro-immunologiques,
et le diagnostic des tumeurs et des hémorragies cérébrales.
PRINCIPE
Les protéines réagissent en milieu acide avec le rouge de pyrogallol et le molybdate pour former un
complexe coloré. L’intensité de la couleur formée est proportionnelle à la concentration de protéines
dans l’échantillon.
COMPOSITION DES REACTIFS
Réactif 1
Solution tampon
Rouge de pyrogallol
Sodium molybdate
50 mmol/l
0,04 mmol/l
Réactif 2
Standard
Albumine 1000 mg/l
PRECAUTIONS
Les réactifs Biomaghreb sont destinés à du personnel qualifié, pour un usage in vitro (ne pas pipeter
avec la bouche).
• Consulter la FDS en vigueur disponible sur demande ou sur www.biomaghreb.com;
• Vérifier l’intégrité des réactifs avant leur utilisation ; et
• Elimination des déchets : respecter la législation en vigueur.
Par mesure de sécurité, traiter tout spécimen ou réactif d’origine biologique comme potentiellement
infectieux. Respecter la législation en vigueur.
PREPARATION DES REACTIFS
Le réactif (R1) et le standard sont prêts à l’emploi.
PREPARATION DES ECHANTILLONS
Urine 24 h (fraichement récoltée) : Stable 8 jours à 2-8 °C ;
Liquide céphalorachidien (fraichement récolté) : Stable 4 jours à 2-8°C.
Les échantillons ne doivent pas contenir du sang.
CONSERVATION ET STABILITE
- Tous les composants du kit sont stables à 2-8°C jusqu’à la date de péremption indiquée sur
l’étiquette.
- Signes de détérioration des réactifs :
- Présence de particules (Turbidité) ;
- Absorbance du blanc (A) à 598 ≥ 0.300.
- Protéger le réactif de la lumière tout en évitant la contamination durant l’utilisation.
- Ne pas utiliser le réactif après la date de péremption.
MATERIEL COMPLEMENTAIRE
• Equipement de base du laboratoire d’analyses médicales ;
• Spectrophotomètre ou Analyseur de biochimie clinique.
LIMITES
L’hémolyse (1,2).
Une liste de médicaments et autres substances interférant avec le dosage a été donnée par Young
et al (3,4)
CONTROLE DE QUALITE
Programme externe de contrôle de la qualité.
Il est recommandé de contrôler dans les cas suivants:
• Au moins un contrôle par série.
• Changement de flacon de réactif.
• Après opérations de maintenance sur l’analyseur.
Lorsqu’une valeur de contrôle se trouve en dehors des limites de confiance, répéter l’opération en
utilisant le même contrôle.
Utiliser des sérums de contrôle normaux et pathologiques.
CALIBRATION
Etalon du coffret (Réactif 2) ou tout calibrant raccordé sur une méthode ou un matériau de réfé-
rence.
La fréquence de calibration dépend des performances de l’analyseur et des conditions de conser-
vation du réactif.
Il est recommandé de calibrer à nouveau dans les cas suivants:
1. changement du lot de réactif ;
2. après opérations de maintenance sur l’analyseur ; et
3. les valeurs de contrôle sortent des limites de confiance.
LINEARITE
La méthode est linaire jusqu’à une limite de 4000 mg/l.
Si le résultat obtenu est supérieur à la limite de linéarité diluer l’échantillon 1/2 avec de NaCl 9g/ l et
multiplier le résultat par 2.
MODE OPERATOIRE
Longueur d’onde: 598 nm.
Température : 15°C-25°C / 37°C.
Cuve: 1 cm d’épaisseur
Ajuster le zéro du spectrophotomètre par l’eau distillée ou l’air.
Pipeter dans une cuvette les volumes suivants :
Blanc Standard Echantillon
Standard - - 20 µl - -
Echantillon - - - - 20 µl
Réactif 1 1 ml 1 ml 1 ml
Mélanger et incuber pendant 5 minutes à 37°C ou 10 minutes à température
ambiante (15-25°C).
Lire l’absorbance (A) de l’échantillon et du standard contre le blanc.
La couleur est stable au moins 30 minutes.
CALCUL
Urines
Protéines mg/l =
(A) Echantillon
(A) Standard
x 1000 (Std conc)
LCR
Protéines mg/l =
(A) Sample
(A) Standard
x 1000 (Std conc)
VALEURS DE REFERENCE
Urine
< 100 mg/24h
(< 150mg/24h
pendant la grossesse)
LCR
Enfants 300 - 1000 mg/L
Adultes 150- 450 mg/L
Ces valeurs sont données à titre indicatif. Chaque laboratoire doit établir sa propre échelle de réfé-
rence.
REFERENCES
- Orsonneau JL et al. An improved pyrogallol RedMolybdate. Method for determining total urinary
protein. Clin chem 1989 : 35 : 2233 – 2236 ;
- Koller A. Total serum protein, Kapiso A et al, Clin Chem the c.v. Mosby Co. St Louis. Toronto, Prin-
ceton 1984, 1316 - 1324 and 418 ;
- young DS. Effects of drugs on Clinical lab. Tests, 4th ed AACC 2001 Press, 1995 ;
- young DS. Effects of diseases on Clinical Lab tests. 4th en AACC 2001.
PROTEINES URINAIRES
Méthode Rouge de Pyrogallol
Réactif pour le dosage quantitatif des protéines
totales dans les urines et le L.C.R. humains
