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IVD
USAGE IN VITRO
FT Fr 48 Date de MAJ : 10/ 2020 Version B
Fabricant Date de
péremption
Usage “In vitro” Température
de conservation
Référence Produit Consulter la notice Conserver à l’abri
de la lumière
Sufsant
pour < n > essais
Numéro de lot
LDL-CHOLESTEROL DIRECT
SIGNIFICATION CLINIQUE
Les lipoprotéines de faible densité ( LDL), sont synthétisées dans le foie sous l’action de différentes
enzymes lipolytiques sur les protéines de très faibles densités (VLDL) riches en triglycérides. De
nombreuses études cliniques et épidémiologiques ont montré qu’une augmentation du Cholestérol
LDL sérique peut être significative d’une augmentation du risque d’athérosclérose et de maladies des
artères coronaires. D’autres études ont montré qu’une diminution du cholestérol-LDL sérique peut
être corrélée avec une régression des lésions athérosclérotiques.
PRINCIPE
Méthode directe avec détergents sélectifs, sans pré- traitement du spécimen.
Au cours de la première phase seules les lipoprotéines non-LDL sont solubilisées par le détergent 1.
Le cholestérol ainsi généré, soumis à l’action de cholestérol oxydase (CO) et du Cholestérol Estérase
(CE) produit un composé incolore.
Au cours de la seconde phase, le détergent 2 solubilise le cholestérol LDL.
Le couple chromogénique développe une réaction colorée proportionnelle à la concentration en cho-
lestérol- LDL. La lecture s’effectue à 546nm (520-580).
REAGENT COMPOSITION
Réactifs1
Enzymes
GOOD pH 7.0 (20°C)
Cholesterol esterase (CHE)
Cholesterol oxydase (CHOD)
Catalase
N- (2-hydroxy-3sulfopropyl)
-3,5-dimethoxyaniline (TODS)
50 mmol/L
380 U/L
380 U/L
400U/mL
0.45 mmol/L
Réactifs2
Enzymes
GOOD PH 7.0
4- Aminoantipyrine (4-AA)
Peroxydase (POD)
50 mmol/L
1.00mmol/L
1000 U/L
Réactifs 3 Calibrateur HDLc/LDLc sérum Humain lyophilisé
PRECAUTIONS
Les réactifs Biomaghreb sont destinés à du personnel qualifié, pour un usage in vitro (ne pas pipeter
avec la bouche).
• Consulter la FDS en vigueur disponible sur demande ou sur www.biomaghreb.com;
• Vérifier l’intégrité des réactifs avant leur utilisation ; et
• Elimination des déchets : respecter la législation en vigueur.
Par mesure de sécurité, traiter tout spécimen ou réactif d’origine biologique comme potentiellement
infectieux. Respecter la législation en vigueur.
PREPARATION DES REACTIFS
Les réactifs R1 et R2 sont prêt à l’emploi.
-Reconstituer le flacon du calibrateur HDLc/LDLc par 1 ml d’eau distillée, puis homogénéiser le
contenu du flacon doucement.
-Attendre 30 minutes avant utilisation.
Par mesure de sécurité, traiter le calibrant comme potentiellement infectieux.
PREPARATION DES ECHANTILLONS
Le patient doit être prélevé après au moins 12h -14h de jeune
-Plasma : prélever sur EDTA ou héparinate de sodium ou lithium ; le citrate ne doit pas être utilisé.
Séparer par centrifugation le plasma des cellules sanguines dans les 3 heures après prélèvement.
-Sérum : Séparer par centrifugation le sérum des cellules sanguines dans les 3 heures après pré-
lèvement.
Les sérums et plasmas ne doivent pas rester plus de 14h à température ambiante.
Le cholestérol-HDL est stable dans le spécimen :
- 7 jours à 2-8°C ;
- 1 mois à -20°C.
CONSERVATION ET STABILITE
Stocker à 2-8°C, dans le flacon d’origine bien bouché et à l’abri de la lumière.
• Avant ouverture : s’ils sont conservés et stockés dans les conditions préconisées, les
réactifs sont stables jusqu’à la date de péremption indiquée sur l’étiquette.
• Après ouverture et en absence de contamination : Les réactifs R1 et R2 sont stables 8
semaines à 2-8°C.
• Après reconstitution : le calibrant est stable 2 semaines à 2-8°C et 3 mois à - 20°C
LIMITES
Ne pas utiliser les réactifs s’ils sont troubles ou après la date d’expiration.
MATERIEL COMPLEMENTAIRE
• Equipement de base du laboratoire d’analyses médicales ;
• Spectrophotomètre ou Analyseur de biochimie clinique.
LINEARITE
La réaction est linéaire de 3,7 mg/dl jusqu’à 1000 mg/dl.
Au delà de cette concentration, diluer l’échantillon 1+1 avec une solution NaCl 9 g/l et refaire le
dosage.
Multiplier le résultat par 2.
La limite de linéarité dépend du rapport des volumes spécimen/réactif.
MODE OPERATOIRE
Longueur d’onde…………………………....600-700 nm
Cuvette…………………………………1 cm d’épaisseur
Température...............................................…………37°C
Zero de l’appareil : eau distillée
Blanc Calibrant Dosage
Réactif R1 300 µl 300 µl 300 µl
Calibrateur - - 4 µl - -
Echantillon - - - - 4 µl
Bien mélanger, laisser reposer 5 minutes à 37°C.
Enregistrer les absorbances A1 à 600 nm contre le blanc réactif
Ajouter Blanc Calibrant Dosage
Réactif R2 100 µl 100 µl 100 µl
Bien mélanger, laisser reposer 5 minutes à 37°C.
Enregistrer les absorbances A2 contre le blanc réactif
CALCUL
Calculer l’augmentation de l’absorbance A = A2-A1
A échantillon
A calibrant
x Concentration du Calibrant
= mg/dl de LDL direct
Avec
mg/dl x 0,02586 = mmol/l
VALEURS DE REFERENCE
Risque faible < 100 mg/dl
Risque modéré 130-160 mg/dl
Risque élevé > 160 mg/dl
-Concentrations testées (mg/dl) sans interférences significatives (+10%) :
Bilirubine conjuguée : 30 mg/dl
Bilirubine Totale : 30 mg/dl
Hémoglobine : 500 mg/dl
Acide Ascorbique : 50 mg/dl
REFERENCES
Kaplan A et al. Lipoprotein.Clin Chem the C.V. Mosby Co.St Louis. Okada M. et al. Low-density lipo-
protein cholesterol can be; chemically measured J. Lab. Clin.Mad., 1998; 132, 195-201;
-Young Ds. Effects of drugs on Clinical Lab. Tests, 4th ed AACC Press, 1995;
-Young DS.Effects of disease on Clinical lab.Tests, 4th ed AACC 2001. 5- Burtis A et al. Clinical Guide
to laboratory tests, 3rd ed AACC 1995.
