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IVD
SIGNIFICATION CLINIQUE
L’ALAT (l’alanine amino transférase) autrefois appelée Glutamique pyruvique Transaminase (GPT)
est une enzyme présente essentiellement dans les cellules du foie, et en plus faible proportion dans
les cellules rénales, cardiaques, et musculaires. La mesure de l’activité ALAT permet la détection
des atteintes hépatiques. Lorsque le foie est atteint, l’ALAT est libérée dans la circulation sanguine
chez les patients souffrant de cirrhose, hépatite, cancer et ictère par congestion biliaire). De façon
générale, les valeurs de l’activité ALAT sont comparées aux activités d’autres enzymes comme les
phosphatases alcalines (PAL), l’aspartate amino transférase (ASAT) et la bilirubine pour définir de
façon précise l’origine des atteintes hépatiques.
PRINCIPE
La détermination cinétique de l’activité ALAT est basée sur la méthode développée par Wrobleski et
la due, et optimisée par Henry et Bergmeyer.
La réaction est initiée par addition de l’échantillon au réactif selon le schéma réactionnel suivant :
GPT
2 oxoglutarate + L-Aspartate Glutamate + oxaloacetate
LDH
Oxaloacetate + NADH + H
+
Malate + NAD
+
Le taux de diminution de la concentration en NADH est directement proportionnel à l’activité alanine
amino transférase dans l’échantillon.
LDH : Lactate Déshydrogénase
COMPOSITION DES REACTIFS
Réactif 1
Solution tampon
Tampon Tris pH 7.5 à 30°C
Alanine
100 mmol/l
500 mmol/l
Réactif 2
Substrat
NADH
LDH
Oxoglutarate
0.18 mmo/l
1200 U/l
15 mmol/l
PRECAUTIONS
Les réactifs Biomaghreb sont destinés à du personnel qualifié, pour un usage in vitro (ne pas pipeter
avec la bouche).
• Consulter la FDS en vigueur disponible sur demande ou sur www.biomaghreb.com.
• Vérifier l’intégrité des réactifs avant leur utilisation.
• Elimination des déchets : respecter la législation en vigueur.
Par mesure de sécurité, traiter tout échantillon ou réactif d’origine biologique comme potentiellement
infectieux. Respecter la législation en vigueur.
PREPARATION DES REACTIFS
Solution de travail :
Reprendre le substrat par 3 ml
REF
(11015) et
REF
(11039) ou 10 ml
REF
(11022) de Tampon R1.
Pour
REF
(11046) reconstituer chaque R2 par un flacon R1.
PREPARATION DES ECHANTILLONS
Sérum ou plasma hépariné sans hémolyse.
CONSERVATION ET STABILITE
Stockés à l’abri de la lumière, dans le flacon d’origine bien bouché à 2-8°C, les réactifs sont stables,
s’ils sont utilisés et conservés dans les conditions préconisées :
• Avant ouverture : Jusqu’à la date de péremption indiquée sur l’étiquette du coffret à +4°C ;
• Après ouverture : (Solution de travail) :
24 heures à 20-25°C;
7 jours à 2-8°C.
MATERIEL COMPLEMENTAIRES
• Equipement de base du laboratoire d’analyses médicales ;
• Spectrophotomètre ou Analyseur de biochimie clinique.
LIMITES
L’hémolyse peut interférer.
CONTROLE DE QUALITE
Programme externe de contrôle de la qualité.
Il est recommandé de contrôler dans les cas suivants:
• Au moins un contrôle par série.
• Changement de flacon de réactif.
• Après opérations de maintenance sur l’analyseur.
Lorsqu’une valeur de contrôle se trouve en dehors des limites de confiance, répéter l’opération en
utilisant le même contrôle.
Utiliser des sérums de contrôle normaux et pathologiques.
LINEARITE
Si la ΔDO/min à 340 nm est supérieure à 0.15, répéter le test en diluant l’échantillon au 1/10 avec
une solution de NaCl à 9 g/l.
Multiplier le résultat par 10.
MODE OPERATOIRE
Longueur d’onde : 340 nm ;
Température : 25 – 30 ou 37°C ;
Cuve : 1 cm d’épaisseur ;
Ajuster le zéro du spectrophotomètre sur l’air ou l’eau distillée.
Solution de travail
1 ml 3 ml
Préincuber à la température choisie (25, 30 ou 37°C)
Echantillon
100 µl 300 µl
Mélanger et incuber 1 minute.
Mesurer la diminution de la densité optique par minute pendant 1 à 3 minutes.
CALCUL
À la longueur d’onde 340 nm,
Δ DO / min x 1750 = UI/l.
VALEURS DE REFERENCE
25°C 30°C 37°C
Femmes
Jusqu’à 16 Ul/l Jusqu’à 22 Ul/l Jusqu’à 31UI/l
Hommes
Jusqu’à 22 UI/I Jusqu’à 29 Ul/l Jusqu’à 40UI/l
REFERENCES
Bergmeyer H. Schaibe and Walefeld. Clin. Chem. 24 58 - 73 (1978);
Bergmeyer and Horder Clin. Chem. Acta 105 147 F (1980) ;
Henry R, J, et al,, Am J clin Path (1960), 34, 381-398.
GPT - ALAT
Méthode cinétique IFCC sans phosphate de pyridoxal
Détermination quantitative de l’activité de l’alanine amino transférase
(EC 2.6.1.2) dans le sérum humain
USAGE IN VITRO
FT Fr 12 Date de MAJ : 10/2020 Version B
Fabricant Date de
péremption
Usage “In vitro” Température
de conservation
Référence Produit Consulter la notice Conserver à l’abri
de la lumière
Sufsant
pour < n > essais
Numéro de lot
