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IVD
CHOLESTEROL-HDL
Méthode de précipitation
Réactif pour le dosage quantitatif du
Cholestérol-HDL dans le plasma humain
USAGE IN VITRO
FT Fr 23 Date de MAJ : 10/ 2020 Version B
Fabricant Date de
péremption
Usage “In vitro” Température
de conservation
Référence Produit Consulter la notice Conserver à l’abri
de la lumière
Sufsant
pour < n > essais
Numéro de lot
SIGNIFICATION CLINIQUE
L’hypercholestérolémie est considérée comme un facteur de risque de l’athérosclérose. Elle peut
être primitive ou secondaire à une insuffisance thyroïdienne, pancréatite, ou à un syndrome néphro-
tique.... Il conviendra de typer cette anomalie par détermination des taux respectifs des différentes
fractions lipidiques (HDL, LDL, VLDL).
Un niveau élevé de HDL cholestérol protège contre des complications cardiovasculaires corona-
riennes. Il peut augmenter en fonction de l’âge, du sexe, de l’activité physique, d’un régime pauvre
en cholestérol et riche en acides gras polyinsaturés ou dans le cas de la prise se de certains médi-
caments tels que les hypolipémiants (fibrates), la vitamine C, les antiépileptiques, l’insuline et les
oestroprogestatifs ou la consommation d’alcool.
PRINCIPE
Les chylomicrons et les lipoprotéines de très faible densité (VLDL) et de faible densité (LDL) conte-
nus dans l’échantillon sont précipités par addition d’acide phosphotungstique en présence d’ions
magnésium. Le surnageant obtenu après centrifugation contient les lipoprotéines de haute densité
(HDL) dont le cholesétrol est dosé par le réactif cholestérol enzymatique du kit complementaire.
COMPOSITION DES REACTIFS
Réactif
précipitant
Acide phosphotungstique
MgCl2 6H2O pH 6,2
13,9 mmol/l
490 mmol/l
PRECAUTIONS
Les réactifs Biomaghreb sont destinés à du personnel qualifié, pour un usage in vitro (ne pas pipeter
avec la bouche).
• Consulter la FDS en vigueur disponible sur demande ou sur www.biomaghreb.com;
• Vérifier l’intégrité des réactifs avant leur utilisation ; et
• Elimination des déchets : respecter la législation en vigueur.
Par mesure de sécurité, traiter tout spécimen ou réactif d’origine biologique comme potentiellement
infectieux. Respecter la législation en vigueur.
PREPARATION DES REACTIFS
Le réactif est prêt à l’emploi.
PREPARATION DES ECHANTILLONS
Sérum ou plasma recueilli sur EDTA.
CONSERVATION ET STABILITE
Le réactif doit être conservé jusqu’à la date de péremption indiquée sur l’étiquette du coffret entre
2-8°C.
LIMITES
Si le réactif est trouble ou coloré, il doit être rejeté.
MATERIEL COMPLEMENTAIRE
• Equipement de base du laboratoire d’analyses médicales ;
• Spectrophotomètre ou Analyseur de biochimie clinique.
CONTROLE DE QUALITE
Programme externe de contrôle de la qualité.
Il est recommandé de contrôler dans les cas suivants:
• Au moins un contrôle par série;
• Changement de flacon de réactif;
• Après opérations de maintenance sur l’analyseur.
Lorsqu’une valeur de contrôle se trouve en dehors des limites de confiance, répéter l’opération en
utilisant le même contrôle.
Utiliser des sérums de contrôle normaux et pathologiques.
MODE OPERATOIRE
• Précipitation
Diluer, dans une solution de NaCl 9 g/l, les sérums dont le taux est supérieur à 3,5 mmol/l de trig-
lycérides.
Sérum...........................................................................500 μl
Réactif précipitant ........................................................50 μl
Bien mélanger, attendre 10 minutes ;
Centrifuger 15 minutes à 5000 t/min.
• Dosage du HDL-Cholestérol :
Reconstituer le réactif cholestérol enzymatique selon la fiche technique du kit complémentaire.
Longueur d’onde : 505 nm (492-550) ;
Température : 37°C ;
Ajuster le zéro du spectrophotomètre par le Blanc Réactif.
Blanc Standard Dosage
Eau distillée
10 µl - - - -
Standard Cholestérol
- - 10 µl - -
Surnageant
- - - - 10 µl
Réactif Cholestérol enzymatique
1 ml 1 ml 1 ml
Mélanger, lire les absorbances après une incubation de 5 minutes à 37° C. La
coloration est stable 30 minutes.
N.B : Une fois le flacon du réactif HDL est entamé, il y a possibilité de formation des cristaux brillants
au fond du flacon mais qui n’ont pas d’influence sur la qualité du produit.
CALCUL
[HDL-Cholestérol] =
DO. Dosage
DO. Standard
x n
Avec n = Valeur du standard
n = 5,17 mmol/l ;
n = 2 g/l.
Multiplier le résultat obtenu par 1,1 pour tenir compte de la dilution effectuée lors de la précipitation:
on obtient la concentration du cholestérol lié aux HDL.
VALEURS DE REFERENCE
Cholestérolémie Evaluation du risque
< 2g/l
< 5,2 mmol/l
Risque faible
2,0 à 2,5 g/l
5,2 à 6,5 mmol/l
Risque modéré en particulier si HDL
cholestérol < 0,35 g/l ;
< 0,9 mmol/l.
> 2,5 g/l
> 6,5 mmol/l
Risque élevé en particulier si HDL
cholestérol < 0,35 g/l ;
< 0,9 mmol/l.
REFERENCES
BURSTEIN M. et al. Lipid Res.11. 583.(1970) ;
Study Group, European Atherosclerosis Society, European Heart Journal, 9, 571 (1988) ;
ARCOL, ISB, 1989, 15, 121 -124.
