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USAGE IN VITRO
FT Fr 55 Date de MAJ : 10/2020 Version B
Fabricant Date de
péremption
Usage “In vitro” Température
de conservation
Référence Produit Consulter la notice Conserver à l’abri
de la lumière
Sufsant
pour < n > essais
Numéro de lot
IVD
A- FER FERROZINE
SIGNIFICATION CLINIQUE
Chez l’Homme, 70 % du fer de l’organisme est lié à l’hémoglobine,
le reste est fixé à des protéines de transport telle que la ferritine (ou
transferrine), ou stockée dans certains tissus notamment le foie et
la moelle osseuse. Des niveaux faibles en fer sérique peuvent être
constatés dans le cas d’une anémie ferriprive (carence martiale) ou
chez les patients atteints d’anémie inflammatoire.
A l’inverse, une surcharge en fer peut apparaître au cours de l’hé-
mochromatose ou lors d’un dysfonctionnement hépatique aigu.
PRINCIPE
A pH 4,8 le fer Ferrique (Fe +++) est libéré instantanément de la
transferrine. L’acide ascorbique le réduit en fer ferreux (Fe++). La
ferrozine forme avec le fer ferreux, un complexe coloré soluble,
mesurable de 560 à 580 nm.
La présence de thiourée permet d’éliminer l’interférence des ions
cuivreux.
COMPOSITION DES REACTIFS
FER FERROZINE
Réactif 1
Guanidine, HCl
Tampon acétate
4,5 mmol/l
pH 5
Réactif 2 Acide ascorbique 40 mmol/l
Réactif 3 Ferrozine 1 mg/l
Réactif 4 Standard 17,9 µmol/l
PRECAUTIONS
Les réactifs Biomaghreb sont destinés à du personnel qualifié,
pour un usage in vitro (ne pas pipeter avec la bouche).
• Consulter la FDS en vigueur disponible sur demande ou sur
www.biomaghreb.com;
• Vérifier l’intégrité des réactifs avant leur utilisation ; et
• Elimination des déchets : respecter la législation en vigueur.
Par mesure de sécurité, traiter tout spécimen ou réactif d’origine
biologique comme potentiellement infectieux. Respecter la légis-
lation en vigueur.
PREPARATION DES REACTIFS
Dissoudre le contenu d’une spatule d’acide ascorbique (environ
250 mg) dans 50 ml de réactif 1 (réactif A).
Ajouter 40 µl de ferrozine dans 1 ml de réactif A (réactif B).
Le réactif B est préparé extemporanément.
PREPARATION DES ECHANTILLONS
Sérum, plasma hépariné non hémolysé.
CONSERVATION ET STABILITE
• Avant ouverture : Jusqu’à la date de péremption indiquée sur
l’étiquette du coffret à + 4°C.
• Après ouverture : Les réactifs A et B sont stables : 3 jours à
20 - 25°C ;
2 semaines à 2 - 8°C.
MATERIEL COMPLEMENTAIRE
• Equipement de base du laboratoire d’analyses médicales ;
• Spectrophotomètre ou Analyseur de biochimie clinique.
LIMITES
L’utilisation de matériel en verre nécessite un trempage de plusieurs
heures dans de l’acide chlorhydrique 2N, puis un rinçage soigneux
à l’eau distillée. Il est donc préférable d’utiliser du matériel plastique
à usage unique.
Les doses élevées d’anticoagulants (Héparine) peuvent provoquer
des troubles dans le mélange réactionnel.
CONTROLE DE QUALITE
Programme externe de contrôle de la qualité.
Il est recommandé de contrôler dans les cas suivants:
• Au moins un contrôle par série.
• Changement de flacon de réactif.
• Après opérations de maintenance sur l’analyseur.
Lorsqu’une valeur de contrôle se trouve en dehors des limites de
confiance, répéter l’opération en utilisant le même contrôle.
Utiliser des sérums de contrôle normaux et pathologiques.
CALIBRATION
• Etalon du coffret (Réactif 3)
La fréquence de calibration dépend des performances de l’analy-
seur et des conditions de conservation du réactif.
Il est recommandé de calibrer à nouveau dans les cas suivants:
1. changement du lot de réactif ;
2. après opérations de maintenance sur l’analyseur ; et
3. les valeurs de contrôle sortent des limites de confiance.
LINEARITE
La réaction est linéaire jusqu’à 1000 µg/dl (179,7 µmol/l).
Au-delà, diluer l’échantillon avec une solution NaCl à 9 g/L et
refaire le dosage en tenant compte de la dilution dans le calcul
du résultat. La limite de linéarité dépend du rapport de volume
échantillon/réactif.
MODE OPERATOIRE
Longueur d’onde : 578 nm (530-590).
Température : 20 -25°C.
Cuve : 1 cm d’épaisseur.
Ajuster le zéro du spectrophotomètre par :
• Réactif A pour les Blancs Echantillons ;
• Blanc Réactif pour le standard et les échantillons.
Blanc
Réactif
Standard Blanc
Echantillon
Echantillon
Eau distillée 200µl - - - - - -
R4 - - 200µl - - - -
Echantillon - - - - 200µl 200µl
Réactif A - - - - 1 ml - -
Réactif B 1 ml 1 ml - - 1 ml
Mélanger et attendre 10 minutes
Mesurer les absorbances à 562 nm
Stabilité de la coloration : 30 minutes
CALCUL
Fer sérique =
DO. Echantillon -DO. Blanc Echantillon
DO Standard
x n
n= 1 mg/l;
n = 17, 9 µmol /l.
VALEURS DE REFERENCE
Homme
69 - 158 µg/dl
12.5 - 28.3 µmol/l
Femme
59 - 145 µg/dl
10.7 - 26 µmol/l
REFERENCES
Persijn et al Clin. Chem. Acta 35,91 (1971);
Stoockey L. Anal. Chem. 42,779 (1970);
Williams et al. Clin. Chem. 23,237(1977).
B- TIBC
SIGNIFICATION CLINIQUE
La transferrine est une protéine de transport du fer. La quantité de
fer susceptible d’être fixée à la transferrine, ajoutée au fer déjà lié,
représente la capacité totale de fixation du fer (TIBC). Le rapport du
taux de fer sérique sur la TIBC représente le coefficient de satura-
tion de la transferrine. La TIBC augmente en cas de carence martiale
due à une insuffisance d’apport de fer ou secondaire à un saigne-
ment chronique. Une diminution de la TIBC peut être associée à un
syndrome inflammatoire, une insuffisance hépatocellulaire ou une
surcharge en fer.
PRINCIPE
La capacité totale de fixation du fer est évaluée après saturation
de la transferrine par une solution de fer et adsorption de l’excès
sur hydroxycarbonate de magnésium. La détermination du fer est
ensuite réalisée à l’aide du kit fer ferrozine.
COMPOSITION DES REACTIFS
Réactif 1
Fer
Solution saturante de fer
5 mg/l
89,5µmol/l
Réactif 2 Hydroxycarbonate de magnésium (adsorbant)
Spatule-doseuse
PRECAUTIONS
Consulter la notice du réactif utilisé pour le dosage du fer.
PREPARATION DES REACTIFS
Les réactifs sont prêts à l’emploi et stables jusqu’à la date de pé-
remption indiquée sur l’étiquette.
PREPARATION DES ECHANTILLONS
Sérum non hémolysé. Le prélèvement peut être conservé 7 jours
entre 2 et 8°C ou plusieurs semaines congelé à - 20°C.
CONSERVATION ET STABILITE
Jusqu’à la date de péremption indiquée sur l’étiquette du coffret
à + 4°C.
MATERIEL COMPLEMENTAIRE
• Equipement de base du laboratoire d’analyses médicales ;
• Spectrophotomètre ou Analyseur de biochimie clinique ;
LIMITES
La contamination par le fer est l’une des causes principales d’er-
reur. L’usage de pipettes et de cuves en matière plastique et à usage
unique est recommandé.
CONTROLE DE QUALITE
• Tout sérum de contrôle titré pour cette méthode ;
• Programme externe de contrôle de la qualité.
Consulter la notice du réactif utilisé pour le dosage du fer.
MODE OPERATOIRE
Echantillon 1 ml
Réactif 1 2 ml
Mélanger, incuber 5 minutes puis ajouter:
Réactif 2 environ 200 mg
Attendre 20 minutes en agitant plusieurs fois. Centrifuger 10
minutes à 3000 tr/mn.
CALCUL
En cas de dosage du fer et de la capacité totale de fixation, il est
souhaitable de commencer par la saturation de la transferrine et
ensuite de mener parallèlement le dosage du fer sérique et de la
capacité totale de fixation.
Tenir compte de la dilution 1/3 pour le calcul.
VALEURS DE REFERENCE
•
44,5 - 73,5 µmol/l ;
• 249 - 412 µg/dl.
II est recommandé à chaque laboratoire de déterminer ses
propres valeurs de références pour chaque population concernée.
REFERENCES
TIETZ N.W. Text book of clinical chemistry, 3rd Ed. CA Burtis, E.R.
Ashwood, W.B.Saunders (1999) p. 1701-1703.
FER FERROZINE
ET CAPACITE TOTALE DE FIXATION DU FER
Détermination quantitative du fer
et de la capacité totale de fixation du fer dans le plasma humain
