6, Rue Ibn Ennafis - Z.I. Lac 3 Tunisie
Tél. : 71 182 500 - Fax : 71 182 250
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SIGNIFICATION CLINIQUE
La bilirubine est un produit issu de la dégradation de l’hémoglobine. Elle est délivrée dans le sang
sous sa forme «libre», puis elle est transformée par le foie en «bilirubine conjuguée» pour pouvoir
être filtrée par le rein. L’augmentation du taux de bilirubine (bilirubinémie) entraîne l’ictère, appelé
couramment «jaunisse», qui peut provenir de la bilirubine non-conjuguée (libre), de la bilirubine
conjuguée, ou des deux fractions. Les ictères à bilirubine non conjuguée sont surtout liés à une
augmentation de la destruction des globules rouges (hémolyse) ou à la diminution de la conjugaison
de la bile au niveau du foie. La cholestase, c’est à dire la diminution ou arrêt de la sécrétion de la bile,
est l’origine la plus fréquente des ictères à bilirubine conjuguée.
PRINCIPE
L’acide sulfanilique réagit avec le nitrite de sodium pour donner de l’acide sulfanilique diazoté. En
présence de diméthyl sulfoxyde (DMSO), la bilirubine totale se couple avec l’acide sulfanique diazoté
pour donner l’azobilirubine. En l’absence de dimethyl sulfoxyde seule la bilirubine directe se couple
avec l’acide sulfanique diazoté pour donner l’azobilirubine.
COMPOSITION DES REACTIFS
Réactif 1 Acide sulfanilique
Acide Chlorhydrique
Diméthylsulfoxyde
30 mmol/l
150 mmol/l
7 mmol/l
Réactif 2 Acide sulfanilique
Acide chlorhydrique
30 mmol/l
150 mmol/l
Réactif 3 Nitrite de sodium 20 mmol/l
Réactif 4
Standard
Voir Mode opératoire
(préparation du standard R4)
PRECAUTIONS
Les réactifs Biomaghreb sont destinés à du personnel qualifié, pour un usage in vitro (ne pas pipeter
avec la bouche).
• Consulter la FDS en vigueur disponible sur demande ou sur www.biomaghreb.com;
• Vérifier l’intégrité des réactifs avant leur utilisation ; et
• Elimination des déchets : respecter la législation en vigueur.
Par mesure de sécurité, traiter tout spécimen ou réactif d’origine biologique comme potentiellement
infectieux. Respecter la législation en vigueur.
ECHANTILLON
Sérum ou plasma recueilli sur EDTA héparine, citrate ou florure et conservé à l’abri de la lumière.
Hémolyse gênante pour la Bilirubine.
MATERIEL COMPLEMENTAIRES
• Equipement de base du laboratoire d’analyses médicales ;
• Spectrophotomètre ou Analyseur de biochimie clinique.
CONTROLE DE QUALITE
Programme externe de contrôle de la qualité.
Il est recommandé de contrôler dans les cas suivants:
• Au moins un contrôle par série;
• Changement de flacon de réactif;
• Après opérations de maintenance sur l’analyseur.
Lorsqu’une valeur de contrôle se trouve en dehors des limites de confiance, répéter l’opération en
utilisant le même contrôle.
Utiliser des sérums de contrôle normaux et pathologiques.
LINEARITE
BT: 20 mg/dl-200 mg/l (340 µmol/l) ;
BD: 10 mg/dl-100 mg/l (170 µmol/l).
MODE OPERATOIRE
• Préparation du standard (R4)
Reconstituer le lyophilisat R4 avec exactement 3 ml d’eau distillée. Attendre 15 minutes. Compléter
la dissolution du lyophilisat par retournements successifs du flacon. Les concentrations exactes sont
indiquées sur chaque flacon.
La stabilité à l’obscurité après reconstitution est :
2 jours à 20° - 25°C ;
4 jours à 2 - 8°C ;
6 semaines à - 20°C.
Il est indispensable d’établir un facteur de calibration dans les conditions du laboratoire dès la re-
constitution du R4.
F=
(Conc.Bilirubine Totale ou Directe) Standard
Abs (Standard) - Abs (BIanc Standard)
• Lecture
Longueur d’onde : 555 nm (546 Hg) ;
Température : 37°C ;
Cuve : 1 cm d’épaisseur ;
Zéro de l’appareil : Blanc Standard ou blanc échantillon.
• BILIRUBINE TOTALE
Solution de travail (BT)
Mélanger 20 Volumes R1 avec 1 volume R3.
Stabilité à l’obscurité
6 H à 20 -25°C ;
2 Jours à 2-8°C.
Standard Echantillon
Blanc Dosage Blanc Dosage
Standard R4
50 μl 50 μl
Echantillon
50 μl 50 μl
Réactif R1
1 ml 1 ml
Solution de
travail (B.T)
1 ml 1 ml
Mélanger et incuber exactement 5 minutes à 37°C
lire l’absorbance (A) du standard et les échantillons contre leurs blancs.
• BILIRUBINE DIRECTE
Solution de travail (B.D)
Mélanger 20 volumes R2 avec 1 volume R3.
Stabilité à l’obscurité
6 H à 20 -25°C ;
2 Jours à 2-8°C.
Standard Echantillon
Blanc Dosage Blanc Dosage
Standard R4
50 μl 50 μl
Echantillon
50 μl 50 μl
Réactif R2
1 ml 1 ml
Solution de
travail (B.D)
1 ml 1 ml
Mélanger et incuber exactement 5 minutes à 37°C
lire l’absorbance (A) du standard et les échantillons contre leurs blancs.
• CALCUL (B.T et B.D.)
[Bil.Tot. ou Dir.] =
Abs (A) échtantillon
Abs (A) Standard
x [Conc. standard]
[Bil.Tot. ou Dir.] = Abs (A) échantillon x F
VALEURS DE REFERENCE
Bilirubine totale 0.2 - 1.0 mg/dl
2 - 10 mg/l
3.4 - 17 µmol/l
Bilirubine Directe 0.0 - 0.2 mg/dl
0.0 - 2 mg/l
0.0 - 3.4 µmol/l
REFERENCES
Hijmans Van den Bergh A.A., Muller P., Biochem, 77, 90 (1916) ;
Walters M.l., Gerarde R.W., Microchem 15, 231 (1970).
BILIRUBINE TOTALE ET DIRECTE
Réactifs pour le dosage quantitatif de la bilirubine totale (accélérateur : DMSO)
et directe dans le plasma humain
USAGE IN VITRO
FT Fr 20 Date de MAJ : Janvier 2020 Version B
Fabricant Date de péremption Usage “In vitro” Température Référence Produit Consulter la notice Conserver à l’abri de la lumière Suffisant Numéro de lot
de conservation pour < n > essais
N.B : Diluer les échan-
tillons de nouveau nés
ou très ictériques au
1/5 dans une solution
de NaCl à 9g/l.
NOTE :
0.585
µmol/I mg/l
1.710
